11/06/01 17:05:22.86
質問です。
現在、あるプラスミドのSal1サイトに50bpくらいのインサートを入れようとしています。インサートは5側がSal1、3側がXho1です。
コロニーPCRでインサートの挿入は確認できたのですが、インサートが短すぎるせいか、制限酵素で向きの確認ができません。(絶対量の関係でバンドが見えない？)
この場合、どうやって向きを確認するべきでしょうか？
ちなみに今は、ベクターの上流に結合するプライマーと、インサートのSal側につくプライマーを使ったPCRで確認する予定です。(正しい向きに挿入されていれば同方向に合成され、特異的バンドは見えないはずだから。)